1、明場觀察是常見顯微鏡觀察方法中大家較常用的一種觀察方式,利用照明光線直接照射在被測產(chǎn)品反射回來后觀察,此種觀察方式基本每款顯微鏡都具備。其廣泛應(yīng)用于病理、檢驗(yàn),用于觀察被染色的切片。
2、暗場觀察。暗場觀察所需要的特殊附件是暗視野聚光鏡。它的特點(diǎn)是不讓光束由下至上的通過被檢產(chǎn)品,而是將光線改變途徑,使其斜射向被檢產(chǎn)品,使照明光線不直接進(jìn)入物鏡,利用被檢產(chǎn)品表面反射或衍射光形成的明亮圖像。此時(shí),視場為黑暗的是背景,而被檢物體則呈現(xiàn)明亮的像。暗場觀察的原理是根據(jù)光學(xué)上的丁道爾現(xiàn)象,微塵在強(qiáng)光直射通過的情況下,人眼不能觀察,這是因?yàn)閺?qiáng)光繞射造成的。若把光線斜射它,由于光的反射,微粒似乎擴(kuò)大了體積,為人眼可見。
暗場觀察的分辨率遠(yuǎn)高于明場觀察,達(dá)0.02-0.004μm。
3、微分干涉觀察,DIC 利用的是偏振光,有四個(gè)特殊的光學(xué)組件:偏振器(polarizer)、DIC 棱鏡、DIC 滑行器和檢偏器(analyzer)。微分干涉觀察是利用特制的渥拉斯頓棱鏡來分解光束。分裂出來的光束的振動(dòng)方向相互垂直且強(qiáng)度相等,光束分別在距離很近的兩點(diǎn)上通過被檢物體,在相位上略有差別。由于兩光束的裂距非常小,而不出現(xiàn)重影現(xiàn)象,使圖像呈現(xiàn)出立體的三維感覺。
據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)分析,其DIC觀察方法出現(xiàn)于60 年代,它不僅能觀察無色透明的物體,而且圖像呈現(xiàn)出浮雕狀的立體感,并具有相襯鏡檢術(shù)所不能達(dá)到的某些優(yōu)點(diǎn),觀察效果更為逼真。
4、偏振光觀察,偏光顯微鏡須需包含起偏鏡,檢偏鏡,補(bǔ)償器或相位片,專用無應(yīng)力物鏡,旋轉(zhuǎn)載物臺(tái)等附件。偏光顯微鏡是將普通光改變?yōu)槠窆膺M(jìn)行鏡檢的方法,以鑒別某一物質(zhì)是單折射(各向同性)或雙折射性(各向異性)。雙折射性是晶體的基本特性。偏光顯微鏡是用于研究所謂透明與不透明各向異性材料的一種顯微鏡。凡具有雙折射的物質(zhì),在偏光顯微鏡下就能分辨清楚,當(dāng)然這些物質(zhì)也可用染色法來進(jìn)行觀察,但有些則不可能,而須利用偏光顯微鏡。因此,偏光顯微鏡被廣泛的應(yīng)用在礦物、化學(xué)等領(lǐng)域,在生物學(xué)和植物學(xué)也有應(yīng)用。
5、熒光觀察方法,它是用短波長的光線照射用熒光素標(biāo)記過的被檢物體,使之受激發(fā)后產(chǎn)生長波長的熒光,然后觀察。
(1)優(yōu)勢:
①檢出能力高(放大作用)
②對細(xì)胞的刺激小(可以活體染色)
③能進(jìn)行多重染色
(2)用途:
①物體構(gòu)造的觀察——熒光素
②熒光的有無、色調(diào)比較進(jìn)行物質(zhì)判別——抗體熒光等
③發(fā)熒光量的測定對物質(zhì)定性、定量分析。
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